Задача является частью проекта по разработке новых методов и подходов, позволяющих детектировать одиночные вирусы и вирусоподобные частицы, а также изучать кинетику их слияния с биологическими мембранами в режиме реального времени.
Проведение сравнительного анализа мембранной активности различных оболочечных вирусов и их мутантных форм нужно для выявления факторов, влияющих на инфекционную активность вирусов.
Вирусные инфекции представляют собой глобальную угрозу для здоровья. Для переноса вирусного генома в клетку хозяина специальные белки оболочечных вирусов должны обеспечить объединение (слияние) вирусной липидной оболочки с клеточной мембраной (плазматической или эндосомальной), только после этого содержимое вируса сможет попасть в цитоплазму клетки. Слияние двух бислойных липидных мембран реализуется через последовательное образование ряд «небислойных» липидных структур, которые характеризуются большой геометрической кривизной. Стабильность и вероятность формирования таких структур определяется физико-химическими свойствами липидного бислоя — его изгибной жесткостью и спонтанной кривизной его компонент. Однако молекулярные механизмы, лежащие в основе каталитического действия белков слияния, в том числе и вирусных, до сих пор остаются невыясненными.
Понимание процесса вирусного слияния имеет решающее значение для поиска и разработки эффективных противовирусных средств, нацеленных на сами вирусные белки или на пути слияния мембран.
Большинство подходов, посвященных исследованию вирусного слияния, основано на спектроскопические методиках — на наблюдении за взаимодействием ансамбля вирусных частиц и мембранных структур, чаще всего мембранных везикул, сравнимых по размеру с вирусными частицами. С их помощью удалось получить достаточно много ценных сведений о процессах слияния вирусов с биологическими мембранами. Однако, поскольку события слияния являются стохастическими по своей природе, исследования, основанные на наблюдении за ансамблем, не могут обеспечить синхронность всех событий слияния, а следовательно, разрешить последовательный переход из одной промежуточной структуры в другую на пути слияния двух мембранных компартментов и соотнести их со структурными изменениями в вирусных белках слияния.
Чтобы обойти эти проблемы, необходимо развитие методов анализа слияния одиночных вирусов с модельными/клеточными мембранами.
Предлагаемая в качестве научного проекта задача заключается в создании эффективной системы, позволяющей в режиме реального времени проводить наблюдения и измерения одиночной вирусной частицы. Предполагается, что это будет микрофлюидное устройство, содержащее чувствительный элемент (детектор) — локальное сужение канала до ~ 100 нм. Геометрические параметры детектора должны быть подобраны так, чтобы измерение ионного тока, текущего через его просвет, позволяло регистрировать появление в нем объекта размером с вирусную частицу (увеличение электрического сопротивления). Такая система, дооснащенная вирус-специфическими рецепторами, может использоваться для иммобилизации или управляемого переноса вирусной частицы внутри детектора.
Работа в проекте может стать основой для подготовки выпускной квалификационной работы студента. При желании и наличии успехов участие в проекте можно будет продолжить и после защиты дипломной работы.
Контакт для заинтересованных студентов: Павел Викторович Башкиров pavel.
bashkirov@sysbiomed.ru.